细胞库的建立可为生物制品的生产提供检定合格、质量相同、能持续稳定的细胞。细胞库是生物制药的源头，是重中之重，对于生产或检定用细胞库，各国监管机构一般要求三级管理，即原始细胞库（PCB）、主细胞库（MCB）和工作细胞库（WCB）。PCB负责提供种子细胞，经过不断的克隆、筛选和鉴定后，形成MCB，再通过传代扩增等过程，最终形成WCB，用于大规模的生物制品生产。如果稳定表达细胞株或者商业化的细胞株为引进和购买的，也可以采用MCB和WCB组成的二级细胞库管理。当然，在某些特殊的情况下，也可以只选择建立MCB一级细胞库，但需经过监管机构批准，足见其对细胞质量和药品安全的严格要求。PCB的数量是根据实际来计算的，每个品种可能都不一样，需要考虑后续生产、检定需要、保藏年限，检测用数量、复检频率等，MCB和WCB冻存多少数量，根据需要确定，需保证后续生产、检定足够，即遵循“够用原则”。

细胞库建库流程

干细胞疗法已被证明是一种很有前途的创新疗法，其中，间充质干细胞（MSC）凭借低免疫原性、高增殖潜力以及免疫调节等特性被广泛应用研究。根据文献统计，截至2023年，全球已有一千多项注册临床试验使用MSC疗法，12种MSC疗法获得监管机构批准商业化。未来，间充质干细胞将在更多疾病的治疗中发挥重要作用。然而，MSC细胞的冻存却非易事，成功建立可靠的MSC细胞库往往需要处理好各种操作细节，此外，MSC在超低温环境下，代谢活性和黏附能力出现降低，细胞膜和细胞骨架发生变化。更为常见的是，MSC 经过超低温冻存，基本上都存在细胞活率下降问题，这对临床治疗效果有一定影响。

MSC作为种子细胞或者工作细胞，细胞冻存是绕不开的步骤。如ICH Q5D所述，防止外源因子污染，保证细胞在各个冻存管中均匀分布，保证复苏细胞具有恒定而符合生产要求的活力，是细胞库制备的三个基本要求。而目前国内大部分生物制药企业还是采用手动的方式来进行细胞灌装，其存在细胞样品与冻存液接触时间长导致细胞状态变差使得细胞库质量差、大量的人工重复操作带来的误差以及染菌风险等问题，为了节省建库的时间、提高细胞的一致性、降低污染风险、节省质量控制的成本，需要一种可靠有效的细胞灌装方法，本篇将为大家重点介绍高通量自动化灌装MSC细胞的解决方案—艾贝泰AbioFill V100细胞灌装系统。

MSC细胞灌装实验内容

1.实验材料：

细胞：贴壁的间充质干细胞（MSC）冻存液：90%FBS+10%DMSO冻存管：Corning 430659（2ml,Ex）AO/PI染色液程序冻存盒等

2.仪器设备：

灌装系统：AbioFill V100细胞灌装系统细胞质量监控：Countleader细胞计数仪FL1000

3.实验参数：

灌注模式：开盖-灌注-封盖灌注流速：350μL/s灌注体积：1000μL 

 

讨论：MSC细胞上机前用30mL冻存液重悬（50mL离心管体系），灌装前细胞留样进行细胞计数，测得细胞活率为97.55%，细胞密度约1.15E6cells/mL。使用灌装系统进行24支冻存管灌注，灌装体积为1mL/管，灌装后取样对24支冻存管的细胞进行细胞计数，并使用程序降温盒在-80℃冻存此24支细胞。冻存24h后，37℃水浴复苏，进行细胞计数。

灌注前/后、复苏后平均活率（左）与平均活细胞密度（右）柱状图（n=24）

 

灌注前/后、复苏后平均活率与活细胞密度表（n=24）

 

经统计分析，发现灌注前、后细胞活率与细胞浓度差异不大，复苏后的细胞活率稍微有所下降，下降幅度约为3%，为可接受范围。活率下降可能因为灌装后取样计数过程使细胞在常温冻存液内时间过长导致，缩短操作时间可以有效避免此活率下降。

 

以上实验证实，AbioFill V100全自动细胞灌装系统能自动化、高效地灌装MSC细胞，灌装前后细胞质量不受到影响，可以建立高质量、均一性的MSC细胞库，解决MSC细胞大规模冻存的工业化问题，促进细胞治疗行业的良好发展。

AbioFill V100灌装系统

FL1000细胞计数仪

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 AbioFill V100全自动灌装系统demo